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鈣成像技術(shù)的基本原理及科學(xué)研究中的應(yīng)用

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       鈣成像技術(shù)是指利用鈣離子指示劑監(jiān)測組織內(nèi)鈣離子濃度的方法。在神經(jīng)系統(tǒng)研究方面,在在體或者離體實驗中,鈣成像技術(shù)被廣泛應(yīng)用于同時監(jiān)測成百上千個神經(jīng)元內(nèi)鈣離子的變化,從而檢測神經(jīng)元的活動情況。
  一、鈣成像技術(shù)的基本原理:
  在生物有機體,鈣離子產(chǎn)生各種各樣的胞內(nèi)信號,這些胞內(nèi)信號幾乎在每種類型的細(xì)胞中都存在,且在很多功能方面有重要作用,例如對心肌細(xì)胞收縮的控制和從細(xì)胞增殖到細(xì)胞死亡整個細(xì)胞周期的調(diào)節(jié)等。在哺乳動物的神經(jīng)系統(tǒng)中,鈣離子是一類重要的神經(jīng)元胞內(nèi)信號分子。在靜息狀態(tài)下,大部分神經(jīng)元的胞內(nèi)鈣離子濃度為 50-100nM,而當(dāng)神經(jīng)元活動的時候,胞內(nèi)鈣離子濃度能上升 10 - 100 倍,增加的鈣離子對于包含有神經(jīng)遞質(zhì)的突觸囊泡的胞吐釋放過程*。也就是說神經(jīng)元的活動與其內(nèi)部的鈣離子濃度密切相關(guān),神經(jīng)元在放電的時候會爆發(fā)出一個短暫的鈣離子濃度高峰。神經(jīng)元鈣成像技術(shù)的原理就是借助鈣離子濃度與神經(jīng)元活動之間的嚴(yán)格對應(yīng)關(guān)系,利用特殊的熒光染料或者蛋白質(zhì)熒光探針,將神經(jīng)元當(dāng)中的鈣離子濃度通過熒光強度表現(xiàn)出來,從而達(dá)到檢測神經(jīng)元活動的目的。
  二、鈣成像技術(shù)在神經(jīng)科學(xué)研究中的應(yīng)用舉例:
  不論采用哪一類鈣離子指示劑,總體上成像記錄過程是非常類似的。包含鈣離子指示劑的細(xì)胞可以通過熒光顯微鏡觀測,然后通過CCD攝像機捕捉、記錄圖像。
  1. 活體記錄神經(jīng)元的活動。由于離體實驗本身的限制,現(xiàn)在越來越多的神經(jīng)方面科學(xué)家傾向于做在體鈣成像實驗,希望能得到更準(zhǔn)確且更能反應(yīng)生理狀況的數(shù)據(jù)。得益于雙光子熒光顯微鏡的發(fā)展,現(xiàn)在在實驗動物處于活體狀態(tài)下的鈣成像技術(shù)取得了飛速進(jìn)展。
  2. 活體記錄神經(jīng)元樹突和樹突棘的活動。由于對于實驗精度的要求,有些科學(xué)家不僅僅想記錄單個神經(jīng)元的反應(yīng),他們還想更確切地知道神經(jīng)元上哪些樹突和樹突棘參與了某個行為,也就是說他們需要在活體條件下,對單根樹突以及某些spine進(jìn)行鈣成像記錄實驗。由于雙光子熒光顯微鏡和 GCaMP 6 基因編碼鈣離子指示劑的發(fā)展,現(xiàn)在,對樹突和樹突棘用鈣成像實驗進(jìn)行記錄也成為了可能。
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